间隔等参数值,所使用的设备为RTCA Cardio(细胞实时无标记多功能分析仪),如若使用其他设备检测数据,所获取的数据值参考单位可能与本实验方案有不同,请注意分辨。
5.0.1%的胰蛋白酶和0.05%胶原酶II,都是用Hanks液配,是现配现用,直接粉末配制,
分别称好所需的质量,同时溶于HBSS中,微孔过滤待用。整个消化过程用的都是此消化液,即0.1%的胰蛋白酶和0.05%胶原酶II溶于HBSS中配制而成。实验前,称量所需的胰蛋白酶和胶原酶II,分别称量好后,放在一起,溶于HBSS中,用注射器接上0.22um 的微孔过滤器,过滤消化液,放入超净台中备用。
心脏会在左边胸腔偏下一些,可以沿4-5肋骨间剪开,一般情况下心脏会跳出来的,直接剪掉,放入冰浴的含有无血清培养基(预冷的4℃亦可)的培养皿中,迅速挤掉心脏内的血液,剔除心脏周围的血凝及纤维组织。
匀快速剪碎心脏。获取的心脏在剪碎时,使用锋利吻合度好的眼科剪刀,可以半年更换一次(根据使用频率也可调整),在剪碎过程中,保守估计在30次以上,剪碎至2-3mm 左右即可,这个过程中,记住如果有大块组织,可以将其挑出剪小,保持组织块大小较为均一,不要剪得过小。
积:混合酶液=1:5(约8ml)加入混合酶液,置于37℃培养箱中。其中混合酶液:0.1%胰酶+0.05%胶原酶Ⅱ(HBSS配置混合液,胶原酶现配现用)。
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